DNA片斷化檢測：
細胞凋亡時主要的生化特征是其染色質(zhì)發(fā)生濃縮, 染色質(zhì)DNA在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300kbp長的DNA大片段, 或180~200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜（DNA ladder）。細胞經(jīng)處理后，采用常規(guī)方法分離提純DNA，進行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色，在凋亡細胞群中可觀察到典型的DNA ladder。如果細胞量很少，還可在分離提純DNA后，用32P-ATP和脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）使DNA標記，然后進行電泳和放射自顯影，觀察凋亡細胞中DNA ladder的形成。
一、重要的洗滌：
不充分的洗滌會導致差異和高背景，從而帶來不理想的實驗結果。如果未結合的材料殘留在微孔板中，那么它會增加背景噪音。有必要的話，可增加洗滌液中的鹽濃度，這會阻止非特異結合反應。如果背景過高，懷疑洗滌不夠時，可以嘗試增加洗滌次數(shù)。
第二、關鍵的封閉：
封閉液的作用是讓不相關的蛋白占據(jù)微孔板中潛在的結合位點。這就降低了可產(chǎn)生信號的抗體非特異結合的機會。如果背景過高，懷疑封閉不充分，那么可以嘗試使用更高濃度的封閉液，或適當延長封閉時間。
目前主要有兩種類型的封閉液：蛋白和非離子型去污劑。使用的類型須取決于多個因素，包括微孔板的表面試劑、吸附的抗原、抗體和檢測試劑。好的封閉液應降低非特異性結合，但它不應當與抗原、抗體或檢測試劑發(fā)生相互作用。
第三、抗體濃度須優(yōu)化：
如果試劑稍有不同，則可能需要優(yōu)化抗體的量。非特異的抗體結合會增加背景。為了防止這一點，切勿使用過多的一抗或二抗。
第四、檢測試劑要適量：
切勿使用過多的檢測試劑。如果濃度過高，或者未正確稀釋，則會導致高背景。也不要顯色過度，如有必要，優(yōu)化一下何時應加入終止液。
dna損傷檢測試劑盒
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