細胞凍存與細胞復(fù)蘇，是細胞培養(yǎng)過程中的常見工作。  
細胞凍存，是指將細胞貯存在超低溫環(huán)境中，使細胞暫時“冬眠"的技術(shù)，在需要的時候再進行復(fù)蘇。  
細胞復(fù)蘇，是把凍存在-80℃冰箱或液氮中的細胞快速解凍，并使細胞重新恢復(fù)生長的技術(shù)。  
本文將為大家介紹細胞凍存與復(fù)蘇的技術(shù)要點和操作步驟。  
細胞凍存篇  
凍存原則  
細胞凍存原則為“慢凍"，即讓細胞在緩慢降溫的條件下逐漸冷凍。  
如果直接將細胞懸液放在超低溫下快速冷凍，細胞會受到冷凍損傷而死亡。在凍存液中添加的保護劑（如DMSO、甘油）和在凍存盒中添加的異丙醇，都起到程序性降溫的作用。  
DMSO使用注意事項  
DMSO能夠快速穿透細胞膜進入細胞中，延緩溫度下降速度，減少細胞內(nèi)冰晶的形成，從而起到保護細胞的作用。  
需注意的是，DMSO溶于培養(yǎng)基時，將釋放大量熱量，所以細胞凍存液需提前配制，不能直接將DMSO加入含有細胞的培養(yǎng)基中，避免燙傷細胞。  
另外，DMSO屬于致癌物質(zhì)，使用時應(yīng)戴好手套，規(guī)范操作。  
程序凍存液配方  
程序凍存液成分一般由基礎(chǔ)培養(yǎng)基、胎牛血清、DMSO組成。血清比例為10%~90%，DMSO比例為5%~10%。根據(jù)普諾賽實驗室細胞培養(yǎng)經(jīng)驗，推薦凍存液配比：55%基礎(chǔ)培養(yǎng)基＋40%胎牛血清＋5%DMSO，難養(yǎng)細胞可用90%胎牛血清＋10%DMSO凍存。  
細胞凍存密度  
細胞凍存和復(fù)蘇過程中，不可避免會損失部分細胞，所以凍存的密度不能太低。提高凍存密度有助于提升細胞復(fù)蘇存活率，推薦密度為100~300萬細胞/mL。

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