寧德核酸檢測實驗室之PCR裝修有哪些注意事項,首先SICOLAB實驗室技術(shù)小編帶您了解:核酸檢測實驗室之PCR實驗室是分子生物學(xué)研究和實驗的常規(guī)方法,廣泛應(yīng)用于生物學(xué)各個領(lǐng)域,例如:艾滋病檢測、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測和診斷,DNA指紋、個體識別、親子鑒定及法醫(yī)物證,動、植物檢疫,動物及其衍生產(chǎn)品檢測,動物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測,轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等。
標(biāo)準(zhǔn)的PCR實驗室分為四個區(qū)域:試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)、樣品處理區(qū)、核酸擴(kuò)增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染,進(jìn)入各個工作區(qū)域必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行,即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)増反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應(yīng)通過傳遞窗進(jìn)行。
核酸檢測實驗室之PCR實驗室建設(shè)可以是分散形式,也可以是組合形式。完成一組PCR實驗,通常應(yīng)經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴(kuò)增及產(chǎn)物分析四個實驗過程。
1、分散形式PCR實驗室建設(shè):
所謂分散形式PCR實驗室,是指完成上述實驗過程的實驗用房彼此相距較遠(yuǎn),呈分散布置形式。對于這種布置形式的PCR驗室,由于各個實驗之間不易相互干擾,因此無需特殊條件要求。
2、組合形式PCR實驗室建設(shè):
所謂組合形式PCR實驗室,是指完成PCR四個實驗過程的實驗用房相鄰布置,組成獨立實驗區(qū)域的形式。對于組合形式PCR實驗室,由于各個實驗間集中布置,容易造成相互干擾,因此,對總體布局以及屏障系統(tǒng)具有一定的要求。各室在入口處設(shè)緩沖間,以減少室內(nèi)外空氣交換。
核酸檢測實驗室之PCR實驗室主要功能
1、試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)的功能是:貯存試劑的制備、試劑的分裝和擴(kuò)增反應(yīng)混合液的準(zhǔn)備,以及離心管、吸頭等消耗品的貯存和準(zhǔn)備。貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū),不能經(jīng)過擴(kuò)增檢測區(qū),試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū),應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。
2、標(biāo)本制備區(qū)的功能是:核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管。對于涉及臨床樣本的操作,應(yīng)符合生物安全二級實驗室防護(hù)設(shè)備、個人防護(hù)和操作規(guī)范的要求。由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染,可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件,避免從鄰近區(qū)進(jìn)入本區(qū)的氣溶膠污染。為避免樣本間的交叉污染,加入待測核酸后,必須蓋好含反應(yīng)混合液的反應(yīng)管。對具有潛在傳染危險性的材料,必須在生物安全柜內(nèi)開蓋,并有明確的樣本處理和滅活程序。
3、核酸擴(kuò)增區(qū)的功能是:DNA合成、DNA擴(kuò)增及檢測。為避免氣溶膠所致的污染,應(yīng)當(dāng)盡量減少在本區(qū)內(nèi)的走動。必須注意的是,所有經(jīng)過檢測的反應(yīng)管不得在此區(qū)域打開。
4、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)的功能是:擴(kuò)增片段的進(jìn)一步分析測定,如雜交、酶切電泳、變性高效液相分析、測序等。核酸擴(kuò)增后產(chǎn)物的分析方法多種多樣,如膜上或微孔板或芯片上探針雜交方法(放射性核素標(biāo)記或非放射性核素標(biāo)記)、直接或酶切后瓊脂糖凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、Southern轉(zhuǎn)移、核酸測序方法、質(zhì)譜分析等。
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)是PCR實驗室最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來源,因此應(yīng)注意避免通過本區(qū)的物品及工作服將擴(kuò)增產(chǎn)物帶出。在使用PCR-ELISA方法檢測擴(kuò)增產(chǎn)物時,必須使用洗板機洗板,廢液必須收集至1mol/LHCl中,并且不能在實驗室內(nèi)傾倒,而應(yīng)當(dāng)至遠(yuǎn)離PCR實驗室的地方棄掉。用過的吸頭也必須放至1mol/LHCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理,如焚燒。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)如溴化乙錠、丙烯酰胺、甲醛或放射性核素等,故應(yīng)當(dāng)注意實驗人員的安全防護(hù)。
核酸檢測實驗室之PCR實驗室建設(shè)要點
1、主體結(jié)構(gòu)
主體為潔凈彩鋼板和鋁合金型材。房間內(nèi)外角均采用鋁合金50內(nèi)圓角鋁,解決了易污染、積灰、清洗困難的問題。結(jié)構(gòu)牢固,線條簡潔美觀大方,密封性能好。
2、標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分隔和壓差控制
將PCR過程分為試劑制備、樣品制備和PCR擴(kuò)增檢測三個獨立的實驗區(qū)。整個區(qū)域有一個整體緩沖走廊。每個獨立的實驗區(qū)都有一個緩沖區(qū)。
PCR實驗室空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)設(shè)計及壓力控制PCR實驗室并沒有嚴(yán)格的凈化要求,但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性,宜采用全送全排的氣流組織形式。同時,要嚴(yán)格控制送、排風(fēng)的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
3、消毒
紫外線燈安裝在三個實驗區(qū)、三個緩沖區(qū)的頂部和轉(zhuǎn)移窗內(nèi)進(jìn)行消毒。在試劑制備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū)還設(shè)置移動式紫外線燈,對實驗臺進(jìn)行局部消毒。
4、機械連鎖不銹鋼傳遞窗
試劑和標(biāo)本通過機械聯(lián)鎖不銹鋼(不推薦電子聯(lián)鎖)傳輸窗口傳輸,確保試劑和標(biāo)本在傳輸過程中不受污染(人物分流)。
5、地面
地面一般采用PVC卷材地面或自流地板,整體性好。易清潔,耐腐蝕。也可以使用水磨石地面,或大瓷磚(至少800mm×800mm)接縫需要小于2mm。盡量避免產(chǎn)塵和積塵現(xiàn)象。
6、照明
燈具應(yīng)選用凈化燈具,便于清潔、無塵。SICOLAB專注于提供實驗室設(shè)計建設(shè)裝修一站式服務(wù)