產品簡介：

嘌呤霉素是由白黑鏈霉菌發(fā)酵代謝產生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動物和昆蟲細胞。作用機制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點結合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點結合后，不會參與隨后的任何反應，從而導致蛋白質合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

別名：二鹽酸嘌呤霉素；嘌呤霉素鹽酸鹽

CAS：58-58-2

分子式：C₂₂H₂₉N₇O₅ · 2HCl

分子量：544.44

純度：≥98%

儲存條件：-20℃

外觀：白色粉末

單位：瓶

有效期：3年

應用： 

常用于篩選能夠表達pac基因（puror）的細胞株，一般2天內可以殺死99%的不表達pac基因的細胞。

使用方法：（根據(jù)實際需要參閱相關文獻配制和使用）

用蒸餾水溶解，參考濃度為50mg/ml，過濾除菌后分裝于-20℃凍存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的儲存液。

篩選哺乳動物細胞的建議濃度為1-10ug/ml，*佳工作濃度可根據(jù)劑量反應曲線確定。

嘌呤霉素劑量反應曲線的確定(以shRNA轉染或者慢病毒感染為例）：

嘌呤霉素的有效篩選濃度與細胞類型、生長狀態(tài)、細胞密度、細胞代謝及細胞所處細胞周期等因素相關。為了篩選到穩(wěn)定表達的shRNA或感染病毒的細胞株，確定殺死未轉染/感染細胞的*低濃度嘌呤霉素非常重要。對于初次使用的細胞，一般需要通過實驗來確定適合自身實驗體系的劑量反應曲線(dose-response curve or kill curve)。

1、在24孔板中以5~8×104cells/孔的密度接種細胞，接種夠量的孔以便進行后續(xù)的劑量梯度實驗。細胞培養(yǎng)箱內培養(yǎng)過夜。

2、在培養(yǎng)過夜后的細胞中更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基，該篩選培養(yǎng)基為含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基(如0、1、2.5、5、7.5、10μg/ml等)，更換培養(yǎng)基后在細胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

3、由于嘌呤霉素可以快速作用于細胞，一般2天內可以殺死99%的未表達pac基因的細胞，所以在加嘌呤霉素后的1-2天就可以進行觀察細胞存活率，從而確定有效殺死正常細胞的藥物*低濃度。如果細胞耐藥性比較強，需要每日觀察，一般4-10天內即可確定嘌呤霉素的*低濃度。

哺乳動物穩(wěn)定表達細胞株的篩選：

轉染含有pac基因的質?；蛘吒腥竞性摶虻牟《竞?，即可篩選穩(wěn)定表達株。

1、細胞轉染或感染48小時后，將細胞置于含有適當濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，此為處理組。

注意：當細胞處于分裂活躍期時，抗生素作用最明顯。細胞過于密集，抗生素產生的效力會明顯下降，所以細胞的密度*好不超過25%。建議同時做一個正常細胞的對照組。轉染或感染48小時后，如果細胞過密也可以消化后重新接種細胞，培養(yǎng)過夜后即可進行嘌呤霉素篩選。

2、每隔2-3天，更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。

3、篩選7天后，對照組正常細胞應該100%死亡，處理組中存活的細胞為表達pac基因的細胞。然后根據(jù)實驗目的進行多克隆或單克隆細胞的篩選。

注意：每日進行細胞生長狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要24小時，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在2-10天。

4、待細胞可以穩(wěn)定生長后，嘌呤霉素的濃度可以減半用于后續(xù)的培養(yǎng)。在得到穩(wěn)定表達細胞株后，一般建議嘌呤霉素也持續(xù)加入，并2-3天更換含有嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)液。

注意事項：

1、 本產品僅供科研使用。請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途

2、 本產品為有毒化合物，為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。